将目的基因与载体在体外重组
得到了目的基因后，还必须将目的基因送入受体细胞内才能进行扩增和生物表达。但是目的基因片段很难直接转入生物体细胞，因为每种生物都是长期进化的产物，具有很强的排他性，如果外源 DNA 片段单独进入受体细胞，必将被破坏。因此，必须有一种运载基因的载体作为媒介物，才能达到目的。载体在基因工程中的作用，就像过河必须有船一样。质粒是细菌内独立于染色体并能自我复制的环状的 DNA 分子，是在细菌细胞分裂时能稳定传递给子代的遗传因子。质粒运送目的基因时，先是利用与获得目的基因同样的内切酶把质粒环的特定位置切开，在切口两端也出现同样的”黏性末端”，然后将目的基因镶嵌上去，再用连接酶使其 DNA分子相邻的两端或是被“剪刀”断开的 DNA 片段重新连接起来再次成环这样就实现了载体 DNA 与目的基因的重新组合，形成重组 DNA 分子由于这些工作都是在生物体外进行的，所以，基因工程操作又叫体外 DNA 重组。从这里可以看出一些工具酶的重要性，没有它们，重组工作就寸步难行。
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